Szybkie badanie serologiczne z antygenem p24 antygenem p24 wyizolowanym z kompleksu immunologicznego w celu wczesnego wykrycia zakażenia wirusem HIV u noworodków ad 6

Niemniej niepokój rodziców, którzy chcą dowiedzieć się, czy ich dziecko jest zarażone, oraz korzyści kliniczne wynikające z wczesnej interwencji powodują, że szybka i dokładna diagnoza zakażenia HIV u noworodków jest ważna. Opracowano różne techniki rozwiązania tego problemu. W dużej mierze testy, takie jak reakcja łańcuchowa polimerazy DNA HIV8-14 i hodowla HIV są kosztowne, czasochłonne, 10,23 i niepraktyczne w badaniu przesiewowym dużych populacji noworodków. Z tych powodów jest mało prawdopodobne, że będą one szeroko stosowane. Obecnie tylko wykrycie IgA swoistej wobec HIV we wczesnym dzieciństwie daje realną nadzieję na to, że stanie się szeroko stosowanym testem z rozsądną czułością. Czytaj dalej Szybkie badanie serologiczne z antygenem p24 antygenem p24 wyizolowanym z kompleksu immunologicznego w celu wczesnego wykrycia zakażenia wirusem HIV u noworodków ad 6

Szybkie badanie serologiczne z antygenem p24 antygenem p24 wyizolowanym z kompleksu immunologicznego w celu wczesnego wykrycia zakażenia wirusem HIV u noworodków ad 5

Dwoje noworodków miało próbki osocza z krwi pępowinowej, które były wielokrotnie dodatnie, choć zbliżone do wartości odcięcia; noworodki te były ujemne podczas testowania pierwszej dostępnej kontrolnej próbki surowicy. Ich próbki osocza krwi pępowinowej można było zneutralizować surowicą swoistą dla antygenu p24 HIV, co sugeruje, że były to wyniki prawdziwie pozytywne. Ogólnie czułość testu w oryginalnych próbkach krwi pępowinowej wynosiła 63% (5 z 8; 95-procentowy przedział ufności, 29 do 97%), a swoistość wynosiła 91% (20 z 22; 95-procentowy przedział ufności, 79 do 100 procent). Testując pojedynczą próbkę surowicy od każdego noworodka na antygen p24 zdysocjowany przez kompleksy immunologiczne, prawidłowo zidentyfikowaliśmy stan zakażenia HIV wszystkich 29 dzieci, które można było ocenić w ciągu pierwszych trzech tygodni życia (dla pacjenta było brak próbki kontrolnej) (rysunek 4). Ryc. Czytaj dalej Szybkie badanie serologiczne z antygenem p24 antygenem p24 wyizolowanym z kompleksu immunologicznego w celu wczesnego wykrycia zakażenia wirusem HIV u noworodków ad 5

Szybkie badanie serologiczne z antygenem p24 antygenem p24 wyizolowanym z kompleksu immunologicznego w celu wczesnego wykrycia zakażenia wirusem HIV u noworodków cd

Próbki o gęstości optycznej w granicach 10 procent wartości odcięcia testowano ponownie, ale w analizie wykorzystano tylko wartość początkową. Izolacja wirusa HIV z kokultury limfocytów krwi obwodowej
Limfocyty z krwi pępowinowej i krwi noworodków wyizolowano jako frakcję jednojądrzastą po rozdzieleniu gradientu gęstości Ficoll-Hypaque. Jednojądrzaste komórki przemyto dwukrotnie zrównoważonym roztworem soli Hanksa (HBSS, Sigma Chemical) i policzono. Współhodowle limfocytów przeprowadzono zgodnie ze standardowymi metodami AIDS Clinical Trials Group, aby wyizolować HIV20 w dużych ilościach. Noworodki uznawano za zakażone wirusem HIV, jeśli dwie kultury były pozytywne w różnych sytuacjach, jeśli przeciwciała HIV utrzymywały się po 15 miesiącach lub gdy pojawiły się powikłania kliniczne spełniające kliniczną definicję zespołu nabytego niedoboru odporności (AIDS). Czytaj dalej Szybkie badanie serologiczne z antygenem p24 antygenem p24 wyizolowanym z kompleksu immunologicznego w celu wczesnego wykrycia zakażenia wirusem HIV u noworodków cd

Szybkie badanie serologiczne z antygenem p24 antygenem p24 wyizolowanym z kompleksu immunologicznego w celu wczesnego wykrycia zakażenia wirusem HIV u noworodków ad

Jeśli te hipotezy byłyby prawidłowe, wolny antygen p24 HIV powinien być rzadko wykryty u noworodków zakażonych wirusem HIV, a antygen zdysocjowany z kompleksem immunologicznym powinien być często wykryty. Ani wolny, ani związany antygen p24 HIV nie zostałby wykryty u noworodków, którzy nie byli zarażeni wirusem HIV. W rezultacie powinniśmy być w stanie wykorzystać wykrywanie antygenu p24 HIV zdysocjowanego przez kompleks immunologiczny jako wiarygodny wskaźnik infekcji HIV u noworodków. Aby przetestować tę hipotezę, badaliśmy częstotliwość, z którą antygen p24 zdysocjowany przez kompleks immunologiczny został wykryty w osoczu z krwi pępowinowej oraz w próbkach surowicy od noworodków urodzonych przez matki zakażone wirusem HIV. Metody
Czterdzieści jeden dzieci i ich matek, wraz z 54 dziećmi narażonymi na HIV w macicy, które były obserwowane przez Konsorcjum Pediatrycznych AIDS w Południowej Kalifornii, zostały przebadane za zgodą uzyskaną zgodnie z wytycznymi Komitetu Ochrony Osobowości Człowieka Uniwersytetu Kalifornijskiego w Los Angeles . Czytaj dalej Szybkie badanie serologiczne z antygenem p24 antygenem p24 wyizolowanym z kompleksu immunologicznego w celu wczesnego wykrycia zakażenia wirusem HIV u noworodków ad

Co-stymulacja CD27 zwiększa obfitość regulatorowych komórek T i zmniejsza miażdżycę u myszy hiperlipidemicznych

Różne adaptacyjne komórki odpornościowe, w tym limfocyty T, odgrywają kluczową rolę w modulowaniu aterogenezy, progresji płytek i dysfunkcji naczyń.

Podczas indukcji adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej komórki T muszą rozpoznawać swój pokrewny antygen poprzez swoisty receptor antygenu komórek T (TCR) i otrzymywać odpowiednią ko-stymulację ich aktywacji, proliferacji, przeżycia i różnicowania efektorowego.3 Ostatnie badania wykazały, że ablacja CD28 lub jego ligandów CD80 lub CD86 łagodzi aterogenezę i promuje stabilne blaszki.4 Oś kostymulująca CD40 / CD154 (CD40L) wywiera wiele różnych efektów i bierze udział w pomaganiu komórkom B w zmianie izotypu przeciwciała i aktywacji komórek, w tym uwalnianie cytokiny. 5 Niedobór CD40 lub CD154 prowadzi do znacznego zmniejszenia obciążenia blaszkami miażdżycowymi.6,7

Ko-stymulujący receptor CD27 i jego ligand CD70 należą do receptora czynnika martwicy nowotworu (TNF) i rodziny ligandów. Obie odgrywają decydującą rolę w ustalaniu odpowiedzi limfocytów T i pamięci. 8-10 CD27 ulega ekspresji na naiwnych komórkach T w stanie ustalonym, podczas gdy występuje również w komórkach naturalnych zabójców (NK), aktywowanych komórkach B i krwiotwórczych komórkach macierzystych u myszy. CD70 ulega przejściowej ekspresji na aktywowanych komórkach T, komórkach B i komórkach dendrytycznych (DC), odzwierciedlając w ten sposób ostatnią stymulację antygenową. Jednakże, rouleukowe komórki nabłonka grasicy (mTEC) i oporne na promieniowanie komórki prezentujące antygen (APC) w blaście właściwej eksprymują CD70 w sposób konstytutywny.11,12 Wyłączny wzór ekspresji CD27 i CD70 sugeruje ważną rolę tych cząsteczek podczas inicjacji T. odpowiedź komórkowa nie tylko w miejscu pierwotnym, ale także w tkance nie-limfatycznej.

Rozwój grasicy konwencjonalnych limfocytów T CD4 + i CD8 + wydaje się niezależny od CD27 w warunkach stanu ustalonego.8 Niemniej, ostatnie badania wskazują, że interakcje między CD27 na rozwijające się komórki T i CD70 na mTEC i DC w rdzeniu zarodników zmniejsza apoptozę i promuje rozwój naturalnych (n) komórek T regulatorowych (Treg) .12

Po ostrej aktywacji immunologicznej, takiej jak infekcja, ko-stymulacja CD27 / CD70 stymuluje klonalną ekspansję komórek T specyficznych względem antygenu i jest wymagana do ustalenia pamięci komórek T, między innymi przez promowanie przeżycia aktywowanych komórek T.13-17.

Co więcej, ko-stymulacja CD27 / CD70 ułatwia przeżycie efektorowych komórek T w tkankach nie-limfatycznych poprzez stymulowanie ich autokrynnej produkcji interleukiny (IL) -2.

Różne podgrupy komórek T CD4 + odgrywają decydującą rolę w progresji miażdżycy. Rzeczywiście, komórki Th1 i ich kluczowe cytokiny, w tym interferon gamma (IFNγ), wywołują zapalenie i miażdżycę tętnic, podczas gdy rola komórek Th17 i ich charakterystycznej cytokiny IL-17 pozostaje kontrowersyjna.18,19 CD4 + Treby tłumią odpowiedź efektorowych komórek T, kontrolując w ten sposób działanie prozapalne. i chroniąc przed miażdżycą. Warto zauważyć, że pacjenci cierpiący na ostre zespoły wieńcowe mają zmniejszoną liczbę i hamują aktywność krążących Treg w porównaniu z kontrolnymi.20-23 U myszy hiperlipidemicznych przenoszenie Tregs4 lub indukcja odpowiedzi Treg24 łagodziło miażdżycę tętnic, podczas gdy wyczerpywanie Treg pogorszyło się. choroba.25

Biorąc pod uwagę znaczącą rolę komórek T w miażdżycy tętnic i wszechstronny wkład sygnalizacji CD27 w modulowaniu funkcji konwencjonalnych i regulatorowych komórek T, zbadaliśmy wpływ niedoboru CD27 na wczesne i zaawansowane stadia miażdżycy w dwóch różnych mysich modelach miażdżycy.

Metody

Cd27 + / + Apoe – / – i Cd27 – / – Apoe – / – Mioty z miotu karmiono normalną karmą dla dzieci przez 18 lub 28 tygodni. W osobnym zestawie eksperymentów, myszy Apoe – / – napromieniowane nasennie rekonstytuowano z użyciem szpiku kostnego Cd27 + / + Apoe – / – lub Cd27 – / – Apoe – / – i karmiono dietą bogatą w cholesterol przez 7 tygodni, aż do ich poświęcenia. . Następnie analizowano zmiany miażdżycowe i przeprowadzono analizę ekspresji genów oraz cytometrię przepływową tętnic, krwi i tkanek limfoidalnych. Limfocyty T CD4 + i Treg zostały wyizolowane ze śledziony i użyte odpowiednio do testów transmigracyjnych i testów supresji. Szczegółowe metody są dostępne w Uzupełniających danych online.

Wyniki

CD27 ulega kolokalizacji z limfocytami T i współpracownikami z uszkodzonymi ludzkimi zmianami miażdżycowymi

Ludzkie blaszki miażdżycowe tętnic szyjnych, sklasyfikowane histologicznie jako zerwane, wykazują wyższą ekspresję CD27 w porównaniu ze stabilnymi blaszkami miażdżycowymi tętnic szyjnych (Figura 1A). CD27 jest prawie wyłącznie eksprymowany na komórkach T CD3 + w ludzkich zmianach miażdżycowych (Figura 1B). Podobne wyniki uzyskano w zmianach miażdżycowych u myszy z hiperlipidemią Apoe – / – zawierających komórki w kształcie limfocytów pozytywne dla CD27. Większość komórek CD27 + była pozytywna dla CD4, CD8, Foxp3, podczas gdy makrofagi (Mac3 +) i komórki mięśni gładkich [SMC; alfa aktyny mięśni gładkich (ASMA) +] nie eksprymuje CD27 (rysunek 1C, patrz materiał uzupełniający online, rysunek S1A-C). Cytometria przepływowa aorty (ryc. 1D-I) i suspensia śledziona
[patrz też: badanie krwi aptt cena, kopia odmiana, pci medycyna ]